在很多的時(shí)候會(huì )不自覺(jué)的講液相色譜儀與氣相色譜儀進(jìn)行比較,看它們各自的構成及其特點(diǎn),這里介紹液相色譜儀的主要系統構成及特點(diǎn),包括輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統等,并且各自有著(zhù)與眾不同之處:
*.分離系統,相對來(lái)說(shuō)分離系統由色譜柱、連接管和恒溫器等部分構成,色譜柱一般長(cháng)度為10~50cm(需要兩根連用時(shí),可在二者之間加一連接管),內徑為2~5mm,由"不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,住內裝有直徑為5~10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構成).固定相中的基質(zhì)是由機械強度高的樹(shù)脂或硅膠構成,它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔徑可達1000?)和比表面積大的特點(diǎn),加之其表面經(jīng)過(guò)機械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣),或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長(cháng)度碳鏈的烷基等)或配體的有機化合物。因此,這類(lèi)固定相對結構不同的物質(zhì)有良好的選擇性。
另外,固定相基質(zhì)粒小,柱床極易達到均勻、致密狀態(tài),極易降低渦流擴散效應?;|(zhì)粒度小,微孔淺,樣品在微孔區內傳質(zhì)短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據柱效理論分析,基質(zhì)粒度小,塔板理論數N就越大。這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小,會(huì )提高分辨率的道理。再者,液相色譜儀的恒溫器可使溫度從室溫調到60C,通過(guò)改善傳質(zhì)速度,縮短分析時(shí)間,就可增加層析柱的效率。
第二.進(jìn)樣系統,一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作,進(jìn)樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。
第三.輸液系統,
液相色譜儀的輸液系統包括高壓泵、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分。流動(dòng)相貯存錯和梯度儀,可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變,包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值,或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)(即使僅有一個(gè)基團的差別或是同分異構體)都能獲得有效分離。
高壓泵的一般壓強為l.47~4.4X107Pa,流速可調且穩定,當高壓流動(dòng)相通過(guò)層析柱時(shí),可降低樣品在柱中的擴散效應,可加快其在柱中的移動(dòng)速度,這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。
第四,就是數據處理系統該系統可對測試數據進(jìn)行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作,使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開(kāi)展。
第五.檢測系統液相色譜儀常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。
1.紫外檢測器主要擁有這樣的特點(diǎn):使用面廣(如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用);靈敏度高(檢測下限為10-10g/ml);線(xiàn)性范圍寬;對溫度和流速變化不敏感;可檢測梯度溶液洗脫的樣品。
2.示差折光檢測器目前這一系統通用性強、操作簡(jiǎn)單,但靈敏度低(檢測下限為10-7g/ml),流動(dòng)相的變化會(huì )引起折光率的變化,因此,它既不適用于痕量分析,也不適用于梯度洗脫樣品的檢測。
3.熒光檢測器凡具有熒光的物質(zhì),在一定條件下,其發(fā)射光的熒光強度與物質(zhì)的濃度成正比。因此,這一檢測器只適用于具有熒光的有機化合物(如多環(huán)芳烴、氨基酸、胺類(lèi)、維生素和某些蛋白質(zhì)等)的測定,其靈敏度很高(檢測下限為10-12~10-14g/ml),痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可采用。
通過(guò)以上的信息可以看出一個(gè)液相色譜儀的設計時(shí)很復雜的,在很多的方面需要協(xié)調性,并且分工合理,該液相色譜儀也是一款性能相當不錯的色譜儀!
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